Novu kit di rilevazione di l'acidu nucleicu Coronavirus (SARS-Cov-2).
New Corunavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flumineralescent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Novu kit di rilevazione di l'acidu nucleicu Coronavirus (SARS-Cov-2) (metudu di sonda RT-PCR fluorescente)
【Packaging specifications 】25 Testi / Kit
【Intended usetà】
Stu kit hè adupratu per a rilevazione qualitativa di l'acidu nucleicu da u novu coronavirus in tamponi nasofaringei, tamponi orofaringei (gola), tamponi nasali anteriori, tamponi mid-turbinate, lavaggi nasali è aspirati nasali da individui sospettati di COVID19 da u so fornitore di assistenza sanitaria. A rilevazione di i geni ORF1ab è N di u novu coronavirus pò esse aduprata per u diagnosticu ausiliariu è u monitoraghju epidemiologicu di a nova infezione da coronavirus.
【Principles of the procciadure 】
Stu kit hè cuncepitu per sonde TaqMan specifiche è primers specifichi cuncepiti per u novu coronavirus (SARS-Cov-2) ORF1ab è sequenze di geni N. A suluzione di reazione PCR cuntene 3 setti di primers specifichi è sonde fluorescenti per a rilevazione specifica di obiettivi, è un set supplementu di primers specifichi è sonde fluorescenti hè utilizzatu cum'è u cuntrollu standard internu di u kit per a rilevazione di geni domestici endogeni.
U principiu di a prova hè chì a sonda fluorescente specifica hè digerita è degradata da l'attività exonuclease di l'enzima Taq in a reazione PCR, in modu chì u gruppu fluorescente di reporter è u gruppu fluorescente spentu sò separati, in modu chì u sistema di monitoraghju di fluoriscenza pò riceve un fluoriscente. signali, è tandu Attraversu l 'effettu arricchimentu di amplification PCR, u signali fluoriscenza di a sonda righjunghji un set threshold value-Ct valore (Cycle threshold). In u casu di nisun ampliconu di destinazione, u gruppu di reporter di a sonda hè vicinu à u gruppu di quenching. À questu tempu, u trasferimentu di l'energia di resonance fluorescente si trova, è a fluoriscenza di u gruppu di reporter hè spenta da u gruppu di quenching, cusì chì u signale fluoriscente ùn pò micca esse rilevatu da u strumentu PCR fluoriscente.
Per monitorà l'usu di reagenti durante a prova, u kit hè equipatu di cuntrolli pusitivi è negativi: u cuntrollu pusitivu cuntene u plasmidi recombinante di u situ di destinazione, è u cuntrollu negativu hè Acqua distillata, chì hè utilizata per monitorà a contaminazione ambientale. Hè cunsigliatu di stabilisce un cuntrollu pusitivu è un cuntrollu negativu simultaneamente durante a prova.
【Main components 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Cumpunimentuenti | |
Name | Specficazione | Quantuità | Quantuità | |
U cuntrollu pusitivu | 180 μL/flacone | 1 | 1 | Plasmidi custruiti artificialmente, acqua distillata |
U cuntrollu negativu | 180 μL/flacone | 1 | 1 | Acqua distillata |
Mix SARS-Cov-2 | 358,5 μL/flacone | 1 | / | Coppie di primer specifici, sonde fluorescenti di rilevazione specifiche, dNTP, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, acqua distillata, ecc. |
Mix d'enzimi | 16,5 μL/flacone | 1 | / | Enzimi Taq, trascrittasi inversa, enzimi UNG, ecc. |
SARS-Cov-2 Mix (Liofilizzato) | 25 teste / fiala | / | 1 | Coppie di primer specifici, sonde fluorescenti di rilevazione specifiche, dNTP, enzimi Taq, trascrittasi inversa, acqua distillata, ecc. |
2x Buffer | 375 μL/flacone | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, acqua distillata, etc. |
Nota:(1) I cumpunenti in diversi kit di batch ùn ponu esse mischiati o scambiati.
(2) Preparate u vostru propiu reattivu: Kit d'estrazione di l'acidu nucleicu.
【Storage conditons è expiration date 】
For BST-SARS-25:Trasportu è magazzinu à -20±5 ℃ per un bellu pezzu.
For BST-SARS-DR-25:Trasportu à a temperatura di l'ambienti. Mantene à -20±5 ℃ per un bellu pezzu.
Evite i cicli ripetuti di congelazione-discongelu. U periodu di validità hè tentativamente stabilitu per 12 mesi.
Vede l'etichetta per a data di fabricazione è usu.
Dopu a prima apertura, u reattivu pò esse guardatu à -20±5 ° C per micca più di 1 mese o finu à a fine di u periodu di reagentu, qualunque data vene prima, per evità cicli ripetuti di congelazione-discongelu, è u numeru di congelazione di reagenti. - i ciculi di scongelu ùn deve micca più di 6 volte.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1.Tipu di mostra applicabile: Soluzione di l'acidu nucleicu estratto.
2.Almacenamiento è trasportu di campioni: Store at-20±5℃for 6 months.Freeze è scongelu i campioni micca più di 6 volte.
【Testing method】
1.Nucleic acid extraction
Sceglite un kit d'estrazione di l'acidu nucleicu adattatu per estrae l'acidu nucleicu virali, è seguite l'istruzzioni di u kit currispondente. Hè cunsigliatu di utilizà un kit di purificazione di l'acidu nucleicu pruduciutu da Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. o un kit di purificazione di l'acidu nucleicu equivalente.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Retirez le mélange SARS-Cov-2 et le mélange enzymatique, faites fondre complètement à température ambiante à l'aide d'un appareil Vortex puis centrifugez brièvement.
(2) 16.5uL Enzyme Mix hè statu aghjuntu à 358.5uL SARS-Cov-2 Mix è mischju bè per ottene a suluzione di reazione mista.
(3) Preparate un tubu octal PCR pulito da 0,2 mL è marcate cù 15 uL di a suluzione di reazzione mista sopra per pozzu.
(4) Aghjunghjite 15 μL di suluzione d'acidu nucleicu purificatu, u cuntrollu pusitivu è u cuntrollu negativu, è copre cù cura u tappu di u tubu octale.
(5) Imbulighjate bè invertendu a testa in giù, è centrifuga rapidamente per cuncentrazione di u liquidu à u fondu di u tubu.
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2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Aggiungete 375ul 2x Buffer à SARS-Cov-2 Mix ((Liofilizzato) per preparare la miscela di reazione. Mescolare accuratamente pipettando e poi centrifugare brevemente. almacenamiento à longu andà.)
(2) Preparate un tubu octal PCR pulito da 0,2 mL è marcate cù 15μL di mistura di reazione per pozzu.
(3) Aghjunghjite 15μL di suluzione d'acidu nucleicu purificatu, u cuntrollu pusitivu è u cuntrollu negativu, è copre cù cura u tappu di u tubu octale.
(4) Imbulighjate bè invertendu a testa in giù, è centrifuga rapidamente per cuncentrazione di u liquidu à u fondu di u tubu.
3. PCR amplification (Per piacè riferite à u manuale di l'instrumentu per i paràmetri di u funziunamentu.)
3. 1 Pone u PCR 8-tube in a camera di mostra di l'instrumentu PCR fluoriscente, è stabilisce a mostra per esse pruvata, u cuntrollu pusitivu è u cuntrollu negativu secondu l'ordine di carica.
3.2 Canale di rilevazione di fluorescenza:
(1) U genu ORF1ab selezziunate u canali di rilevazione di FAM (Reporter: FAM, Quencher: Nisunu).
(2) N gene selezziunà u canali di rilevazione di VIC (Reporter: VIC, Quencher: Nisunu).
(3) U genu standard internu selezziunate u canali di rilevazione di CY5 (Reporter: CY5, Quencher: None).
(4) A Riferenza Passiva hè impostata à ROX.
3.3 Parametri di u prugramma PCR:
Passu | Température (℃) | U tempu | Numero di ciculi | |
1 | Reazione di trascrizione inversa | 50 | 15 min | 1 |
2 | Attivazione di l'enzima Taq | 95 | 2,5 minuti | 1 |
3 | Attivazione di l'enzima Taq | 93 | 10 s | 43 |
Estensione di ricottura è acquisizione di fluorescenza | 55 | 30 s |
Dopu avè stabilitu, salvate u schedariu è eseguite u prugramma di reazione.
4.Results analysis
Dopu chì u prugramma finisci, i risultati sò salvati automaticamente, è a curva di amplificazione hè analizata. A curva di amplificazione hè stabilita à u sogliu predeterminatu di l'instrumentu.
【Explanation of test results 】
1. Determinà a validità di l'esperimentu: U cuntrollu pusitivu FAM, canali VIC duveria avè una curva di amplificazione tipica, è u valore Ct hè generalmente menu di 34, ma pò fluttuà per via di e diverse paràmetri di soglia di diversi strumenti. U cuntrollu negativu FAM, canali VIC deve esse Ct non-amplified. Hè accunsentutu chì i requisiti di sopra deve esse cumpletu à u stessu tempu, altrimenti sta prova hè invalida.
2. Giudiziu di u risultatu
Canale FAM/VIC | U risultatu di u ghjudiziu |
Ct<37 | A prova di mostra hè pusitiva |
37≤Ct<40 | A curva di amplificazione hè in forma di S, è i campioni suspetti anu da esse esaminati; se i risultati di riesame sò cunsistenti, hè ghjudicatu cum'è pusitivu, altrimente hè negativu |
Ct≥40 o senza amplificazione | A prova di mostra hè negativa (o sottu à u limitu minimu di rilevazione di u kit) |
Nota: (1) Se u canali FAM è u canali VIC sò pusitivi à u stessu tempu, u SARS-Cov-2 hè determinatu per esse pusitivu.
(2) Se u canali FAM o VIC hè pusitivu è l'altru canale hè negativu, a prova deve esse ripetuta. S'ellu hè pusitivu à u stessu tempu, serà ghjudicatu cum'è SARS-Cov-2 pusitivu, altrimenti serà ghjudicatu cum'è SARS-Cov-2 negativu.